5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

保存條件 Store at -20℃.

CAS號(hào)：7240-90-6

分子式：C14H15BrClNO6

分子量：408.63

MDL：MFCD00005666

級(jí)別：超純

純度：＞99%

外觀/性狀：白色至淺黃色粉末

溶解性：溶于DMSO，溶解度可達(dá)20mg/mL。也溶于DMF。

敏感性：對(duì)光敏感,易吸潮

用途：X-Gal是β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色檢測(cè)以及藍(lán)白斑篩選。

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

配制儲(chǔ)存液：

稱取200mg X-Gal于15 mL 離心管，向其中加入10mL DMF，旋渦震蕩使其充分溶解后，建議分裝，-20℃避光保存，有效期可達(dá)6-12個(gè)月。

藍(lán)白斑篩選：

1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養(yǎng)基溶液

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右。

2）每毫升培養(yǎng)基內(nèi)加入10 μL 20 mg/mL X-gal溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達(dá)到1 mM）；

3）加入適量抗生素；

4）混勻后按照平板大小倒入適量培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，接種細(xì)菌于37℃過夜培養(yǎng)。

2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面

1）于無菌超凈工作臺(tái)制備平板（如LB 瓊脂板）；  2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準(zhǔn)備好的平板上；

注：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產(chǎn)生假陽性，因此，為了得到更好結(jié)果，建議后續(xù)操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。

3）37℃孵育直至所有液體被吸收（30 min或更長）。接種細(xì)菌于37℃過夜培養(yǎng)。