Western及IP細(xì)胞裂解液

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Western及IP細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

WIP組織細(xì)胞裂解液（Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ），是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本產(chǎn)品裂解細(xì)胞獲得的裂解產(chǎn)物，可用于PAGE，蛋白印跡（Western Blot），免疫沉淀（immnolprecipitation，IP）,免疫共沉淀（co-IP） 和蛋白與多肽的分離純化。

WIP裂解液的主要成分為Tris（pH 7.5，20mM），150mM NaCl，去垢劑Triton X-100以及多種蛋白酶抑制劑,無需自備PMSF、磷酸酶抑制劑等蛋白酶抑制劑。WIP不僅可以用于細(xì)胞培養(yǎng)物的裂解，也可直接用于大多數(shù)動(dòng)物組織的裂解。在有效地裂解組織和細(xì)胞的同時(shí)，可強(qiáng)烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子結(jié)構(gòu)和蛋白間相互作用。

用WIP裂解得到的組織細(xì)胞蛋白樣品，可以用博奧森生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford試劑盒測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

包裝清單

WIP組織細(xì)胞裂解液        30ml

PMSF（100X）             0.3ml

保存條件：

-20°C保存，一年有效。

注意事項(xiàng)：

1．為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果，可適當(dāng)分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。

2．PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。

3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4°C進(jìn)行。

4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請(qǐng)立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。

二.使用方法說明

1．培養(yǎng)細(xì)胞

取出WIP裂解液，待融化后，顛倒混勻數(shù)次，適量分裝凍存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最終濃度為1mM），混勻，立即使用。

貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍（如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗）。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用槍吹打數(shù)下，使WIP和細(xì)胞充分接觸。通常WIP接觸細(xì)胞數(shù)秒后細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞，收集培養(yǎng)細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍（如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗），用手指把細(xì)胞用力彈散，按6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果細(xì)胞數(shù)量較大，應(yīng)按50-100萬細(xì)胞/管分裝或根據(jù)細(xì)胞數(shù)量按比例增加WIP。用手指輕彈管底以促進(jìn)WIP和細(xì)胞充分接觸，裂解*時(shí)應(yīng)無明顯的細(xì)胞顆粒。

裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。

2．組織樣品

取Ep管，分別稱重標(biāo)記，把組織切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入WIP（如裂解不*，可以適當(dāng)增加WIP的用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當(dāng)減少WIP的用量）。用手握式電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果組織樣品本身非常細(xì)小，如淋巴細(xì)胞，可直接加入WIP裂解，通過振蕩（Vortex）以使樣品裂解*